血清在培養基中扮演著這么多的人物,那么它在培養的進程中也會出現一些的問題,比如說:在培養進程中會出現一個個“小黑點”的現象,這是怎樣一回事呢?
我們一旦發現培養基中有黑點,我們先不要著急,也不要慌張,要搞清楚這個黑點是什么?什么構成的?
首要,要肉眼查詢培養基是否混濁,然后,在鏡下查詢培養細胞生長的狀況,黑點是否游動等。如果細胞被污染,微生物則會很多繁衍,培養基就會敏捷變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下查詢細胞,生長狀況出色,與黑點出現前比較,沒有任何改變,那么,黑點的出現或許與以下幾種狀況有關:
首要或許是細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;再有或許便是血清質量欠好,重復凍融的效果;然后或許是制作培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;其次或許是亦有或許是制作培養基的水質、容器不合格(可應用離心、過濾的方法去除這些黑點);或許是培養的原代細胞中出現小黑點(或許是原代組織中的雜質,屢次傳代能夠消除)。
那么我們怎樣防止黑點生成呢?經過我們多年的從業經驗,以為至少要做到以下幾點:
(1)盡或許地減少血清凍融次數;
(2)培養基無需37℃水??;
(3)培養基保持PH值7.0- 7.2;
(4)嚴格控制制作培養基的水質,容器定時沖刷;
(5)掌握細胞傳代的機會,細胞切勿生長過老。
選擇血清時要結合專業知識,盡可能選用客觀性強的指標,在儀器和試劑允許的條件下,選用特異性強、ELISA試劑盒靈敏度高、準確可靠的客觀指標,一定要事先規定讀取數值的嚴格標準,只有這樣才能準確地分析自己的實驗結果,從而也大大提高了自己實驗結果的可信度。